Главная » 2014 » Октябрь » 1 » Изучение защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagets patula L.) при экспериментальных
1:46 AM
Изучение защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagets patula L.) при экспериментальных
Изучение защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagets patula L.) при экспериментальных токсических поражениях печени
Диссертация
Автор: Терехов, Александр Юрьевич
Название: Изучение защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagets patula L.) при экспериментальных токсических поражениях печени
Справка: Терехов, Александр Юрьевич. Изучение защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagets patula L.) при экспериментальных токсических поражениях печени : диссертация кандидата медицинских наук : 14.00.25 / Терехов Александр Юрьевич; [Место защиты: ГОУВПО "Пятигорская государственная фармацевтическая академия"] Пятигорск, 2006 191 c. :
Объем: 191 стр.
Информация: Пятигорск, 2006
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО СОЗДАНИЮ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ ПРЕПАРАТОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
11 Поиск веществ растительного происхождения с гепатозащитной активностью
12 Современные представления о роли перекисного окисления липидов в патогенезе токсических поражений печени и применении антиоксидантов при данной патоло- 18 гии
13 Растения рода Бархатцы - химический состав и биологическая активность 27 ВЫВОДЫ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И' МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
21 Характеристика объектов исследования
22 Лабораторные животные и экспериментальные модели гепатопатий
23 Постановка опытов и основные экспериментальные серии
231 Определение острой токсичности
232 Обоснование выбора препарата сравнения и доз исследуемых субстанций
233 Первичная оценка гепатозащитной активности различных субстанций из цветков бархатцев распростертых
234 Расширенное изучение гепатозащитного действия различных субстанций из цветков бархатцев распростертых
235 Изучение терапевтического действия комплекса флавонодов
236 Изучение отдаленных результатов лечения хронического поражения печени
СС14 комплексом флавоноидов
237 Изучение влияния комплекса флавоноидов на желчевыделительную и желчеоб-разовательную функции печени у интактных крыс и в условиях острого СО4- 34 гепатоза
238 Изучение интенсивности перекисного окисления липидов и активности антиок-сидантной системы у интактных животных после курсового введения патулетина
24 Методы исследования 38 241 Оценка поражения печени по биохимическим показателям
2411 Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАт) в сыворотке крови
2412 Определение активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови
2413 Определение активности холинэстеразы (ХЭ) в сыворотке крови
2414 Определение содержания общего и связанного билирубина в сыворотке крови
2415 Определение содержания триглицеридов (ТРГ) в сыворотке крови и печени
2416 Определение содержания фосфолипидов (ФЛ) в сыворотке крови и печени
2417 Определение общего холестерина в сыворотке и крови и гомогенате печени
2418 Тимоловая проба (ТП) сыворотки крови
2419 Определение содержания гликогена в печени
24110 Определение содержания нуклеиновых кислот (НК) в печени
24111 Определение содержания общего белка в печени
24112 Определение содержания глюкозы в сыворотке крови
24113 Определение содержания оксипролина (ОП) в печени
24114 Определение содержания гликозаминогликанов (ГАГ) в сыворотке крови 41 242 Гистоморфологическая оценка поражения печени 41 243 Оценка про-/антиоксидантного статуса
2431 Определение содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови
2432 Определение содержания ТБК-активных продуктов в гомогенате печени
2433 Определение содержания диеновых конъюгатов в гомогенате печени
2434 Определение интенсивности спонтанного и индуцированного ПОЛ в постъядерной фракции печени •
2435 Определение общей антиоксидантной активности (АОА) сыворотки крови
2436 Определение активности супероксиддисмутазы (СОД)
2437 Определение активности каталазы
2438 Определение содержания восстановленного глутатиона (08Н) в печени
2439 Определение активности глутатионпероксидазы (ГП) в печени
24310 Определение активности глутатион-8-трансферазы (ГБТ) в печени
24311 Определение НАДФ+-редуктазной активности печени
24312 Определение активности глутатионредуктазы (ГР) в печени
244 Оценка желчесекреторной функции печени
2441 Определение скорости секреции желчи
2442 Определение содержания холестерина и желчных кислот в желчи
245 Выделение постъядерной фракции печени (ПФП)
246 Определение антиоксидантной активности индивидуальных флавоноидов в модельной системе 46 25 Статистическая обработка результатов эксперимента 46 Результаты и их обсуждение
ГЛАВА 3 ПЕРВИЧНАЯ ОЦЕНКА ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ АКТИВНОСТИ РАЗ
ЛИЧНЫХ СУБСТАНЦИЙ ИЗ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ РАСПРОСТЕРТЫХ
31 Изучение гепатозащитного действия водного извлечения из цветков бархатцев распростертых на модели острого поражения печени тетрахлорметаном
32 Изучение гепатозащитного действия порошка из цветков бархатцев распростертых на модели острого поражения печени тетрахлорметаном
33 Изучение гепатозащитного действия комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых на модели острого поражения печени тетрахлорметаном 54 ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ
ГЛАВА 4 РАСШИРЕННОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ РАСПРОСТЕРТЫХ
41 Изучение острой токсичности комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых
42 Изучение гепатозащитной активности комплекса флавоноидов на модели острого ССЦ-гепатоза
43 Изучение гепатозащитной активности комплекса флавоноидов на модели острого токсического поражения печени индометацином 71 ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ
ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ РАСПРОСТЕРТЫХ НА МОДЕЛИ ХРОНИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ СС
51 Изучение терапевтического действия комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых на модели хронического поражения печени СС
52 Изучение отдаленных результатов лечения хронического поражения печени ССЛ4 комплексом флавоноидов из цветков бархатцев распростертых 104 ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ
ГЛАВА 6 ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА ГЕПАТОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ РАСПРОСТЕРТЫХ ПРИ ТОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЯХ ПЕЧЕНИ
61 Изучение влияния комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых на про-/антиоксидантный баланс при острых токсических поражениях печени
62 Влияние лечебного применения комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых на про-/антиоксидантный гомеостаз при хроническом поражении пе- 113 чени
63 Изучение влияния индивидуального флавоноида патулетина из бархатцев распростертых на свободнорадикальное ПОЛ в системе in vitro
64 Влияние курсового применения патулетина из цветков бархатцев распростертых на прооксидантно-антиоксидантный гомеостаз и ферменты детоксикации у здоровых 125 животных
65 Изучение влияния комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых на образование и секрецию желчи в норме и при остром СС14-гепатозе
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ
Введение:
Актуальность проблемы. В связи с ухудшением экологической обстановки и ростом числа гепатотоксических ксенобиотиков актуальной задачей является создание новых эффективных гепатопротекторных препаратов, нормализующих строение, метаболизм, функции паренхимы печени. В последние годы возрос и имеет дальнейшую тенденцию к распространению удельный вес заболеваний гастроэнтерологической патологии, около половины которой составляют заболевания печени. В РФ заболеваемость гепатитами различных форм за истекший год выросла в целом на 15%, а среди детей - наполовину [75].
Особенно актуальной является проблема терапии заболеваний печени токсической этиологии, т.к. печень является основным органом, в котором осуществляется метаболическая биотрансформация ксенобиотиков, многие из которых обладают гепатотоксическими свойствами. Известно, по крайней мере, 80000 гепатотоксических соединений, с которыми человек контактирует в течение всей жизни. В 30% случаев острых отравлений возникают клинические проявления химического повреждения печени [150].
Повреждения печени могут вызывать различные группы лекарственных препаратов: противотуберкулезные препараты [65, 95, 180], антибиотики [35, 164, 166], нестероидные противовоспалительные средства [39, 65, 167, 185, 211, 267], противоопухолевые препараты [101, 122]. Побочные эффекты лекарственных препаратов выступают в роли причинного фактора 40 % гепатитов у пациентов старше 40 лет [144].
Кроме того, поражения печени довольно часто развиваются у больных токсикоманией [144] и у лиц злоупотребляющих алкоголем, что связано с его довольно выраженной гепато-токсичностью [50, 85, 149]. Отмечается [7], что после вирусов алкоголь является второй по частоте причиной хронических диффузных заболеваний печени. Доля алкогольной болезни печени среди всех ее токсических поражений составляет 60 - 70% [141]. Злоупотребление алкоголем представляет важную медицинскую и социальную проблему, что связано с существующей тенденцией увеличения приема алкоголя, наблюдаемой во всем мире, особенно в странах Европы, а также в России и США.
Для терапии различных заболеваний печени используется довольно разнообразный арсенал препаратов, разнонаправлено действующих на клетки печени (антиоксиданты, ингибиторы метаболизма ксенобиотиков, средства, осуществляющие регенерацию мембран гепа-тоцитов (эссенциале, эплир, липостабил), средства, стимулирующие регенерацию паренхимы печени (кальция пангамат, метионин, уридин, цитидин, метилметионинсульфония хлорид, оротовая кислота)) [23], но в соответствии с современной классификацией лекарственных средств, из их числа выделяют сравнительно небольшую группу гепатопротекторов, обладающих избирательным терапевтическим действием на печень. К ним относятся легалон, си-либор, катерген, эссенциале и некоторые другие препараты [118], при этом эффективность имеющихся гепатопротекторов не всегда оказывается достаточной [11,65, 107, 176]. Кроме того, на фармацевтическом рынке РФ по-прежнему доминируют зарубежные лекарственные средства, в частности, карсил, легалон, силибинин, холафлукс, а на долю отечественных гепатопротекторов приходится всего 23% [175, 200].
Таким образом, в связи с неблагоприятной экологией, ростом потребления алкоголя, распространением токсикоманий, бесконтрольным применением медикаментов, недостаточной эффективностью существующих гепатопротекторов, изыскание новых препаратов, повышающих резистентность печени к действию химических агентов и нормализующих ее метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции, а также внедрение этих препаратов в широкую медицинскую практику имеет особую социальную значимость. При этом в первую очередь, предпочтение отдается препаратам растительного происхождения, сочетающим достаточную эффективность, широту терапевтического действия и относительную безвредность, часто оказывающим положительное влияние на течение сопутствующей патологии.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является экспериментальное изучение эффективности защитного действия биологически активных веществ из цветков бархатцев распростертых (Tagetes patula L.) при токсических поражениях печени и некоторых сторон механизма гепатопротекторной активности.
Для реализации указанной цели поставлены следующие задачи:
• выявление наиболее активного комплекса биологически активных веществ на модели острого поражения печени тетрахлорметаном и определение его эффективной дозы;
• изучение эффективности лечебно-профилактического действия наиболее активного комплекса по расширенному набору биохимических показателей и гистоморфологической картине печени при остром токсическом поражении печени тетрахлорметаном и индомета-цином;
• изучение эффективности терапевтического действия наиболее активного комплекса при хроническом поражении печени тетрахлорметаном в сравнении с карсилом;
•изучение некоторых сторон механизма гепатозащитного действия наиболее активного комплекса и индивидуальных соединений, входящих в его состав:
• изучение антиоксидантной активности in vitro и in vivo и влияния на эндогенную антиоксидантную систему в норме;
• изучение влияния на состояние про-/антиоксидантного равновесия при острых токсических и хроническом поражениях печени;
• изучение влияния на желчеобразовательную и желчевыделительную функцию печени в норме и при экспериментальном поражении печени.
Научная новизна. В опытах на белых крысах впервые установлено выраженное гепа-тозащитное действие комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых при лечебно-профилактическом применении на фоне острого токсического поражения печени тет-рахлорметаном и индометацином. Установлено, что комплекс флавоноидов из цветков бархатцев обладает выраженным лечебным действием при хроническом поражении печени тет-рахлорметаном и по его эффективности превосходит препарат сравнения карсил, т.к. обладает более выраженным и стойким лечебным эффектом. Впервые показано, что основной компонент комплекса флавоноидов бархатцев - метоксилированный флавонол патулетин — обладает выраженной антиоксидантной активностью в системе Ре2+-зависимого ПОЛ липосом, сравнимой с таковой кверцетина, а при введении в организм животных является мощным индуктором глутатион-Б-трансферазы и повышает содержание в печени глутатиона восстановленного и активность глутатионредуктазы. В механизме как профилактического, так и лечебного действия комплекса флавоноидов из бархатцев основную роль играет сохранение или восстановление про-/антиоксидантного равновесия за счет их собственной антиоксидантной активности, усиления естественных механизмов детоксикации и антиоксидантной защиты через активацию глутатионовой системы. Впервые выявлена способность комплекса флавоноидов из цветков бархатцев оказывать стимулирующее и нормализующее влияние на' процессы желчеобразования и желчевыделения.
Практическая значимость работы. Полученные результаты показали наличие выраженной гепатозащитной активности комплекса флавоноидов из цветков бархатцев распростертых при острых и хроническом поражении печени, превосходящей таковую препарата сравнения - карсила. В связи с чем, возможно использование комплекса флавоноидов бархатцев для создания лекарственного препарата для профилактики и лечения различных заболеваний печени, особенно токсической этиологии.
Внедрение результатов исследования в практику. По результатам исследований разработано информационное письмо, которое внедрено в план работы кафедр органической химии (акт внедрения от 8.02.2006) и технологии лекарств (акт внедрения от 8.02.2006) Пятигорской ГФА Росздрава и производственного объединения «Эвалар» г. Бийск (акт внедрения от 10.02.2006).
Положения, выдвигаемые на защиту: 1. Среди изученных субстанций, выделенных из цветков бархатцев распростертых, наиболее выраженным гепатозащитным действием в условиях острого поражения печени тетрахлор-метаном обладает комплекс флавоноидов в дозе 100 мг/кг.
2. Гепатозащитное действие комплекса флавоноидов в дозе 100 мг/кг превышает действие карсила в эквивалентной дозе в 1,8 раза при остром поражении печени тетрахлорметаном и в 2,0 раза — при поражении индометацином.
3. Комплекс флавоноидов в дозе 100 мг/кг обладает выраженным лечебным действием при хроническом поражении печени тетрахлорметаном, превышающим действие карсила в эквивалентной дозе.
4. Одновременно с нормализацией состояния печени под влиянием комплекса флавоноидов при острых и хроническом поражениях печени отмечается более выраженное, чем под влиянием карсила снижение содержания перекисных продуктов, увеличение активности СОД и каталазы в печени и связанное с этим повышение антиокислительного индекса.
5. Комплекс флавоноидов в дозе 100 мг/кг» оказывает стимулирующее (у здоровых животных) или нормализующее (у крыс с острым поражением печени тетрахлорметаном) влияние на образование и выделение желчи и по эффективности превышает действие карсила на 86%.
6. Патулетин, составляющий 62,5% комплекса флавоноидов, обладает выраженной антиок-сидантной активностью в модельной системе in vitro и проявляет антиоксидантное действие in vivo; повышает в 1,8 раза антиокислительный индекс организма, являясь мощным индуктором глутатион-8-трансферазы (3-хкратная индукция), повышая активность глутатионре-дуктазы и содержание восстановленного глутатиона в печени.
Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздра-ва» (номер государственной регистрации 01200101060).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы изложены на 57-й, 58-й, 59-й и 60-й научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск 2002, 2003, 2004, 2005 гг.).
Публикации. По материалам работы опубликовано 17 работ, в том числе 9 в центральной печати.
Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 167 страницах текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), главы материалы и методы, результатов и их обсуждения (4 главы), заключения, общих выводов, списка литературы, включающего 277 источников, в том числе 63 иностранных, и приложения. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 67 рисунками.
